常用生化試劑Invitrogen 15596-026

TriZol試劑是一種完整、即用型試劑，可從多種生物樣品中分離高質(zhì)量總 RNA 或同時(shí)分離 RNA、DNA 和蛋白。該苯酚和異硫氰酸胍的單相溶液設(shè)計(jì)用于在一小時(shí)內(nèi)從人、動(dòng)物、植物、酵母菌或細(xì)菌來(lái)源的細(xì)胞和組織樣品中分離 RNA、DNA 和蛋白的單獨(dú)組分。

TriZol試劑的主要特點(diǎn)包括：

• 可從同一樣品中分離 RNA、DNA 和蛋白

• 擁有強(qiáng)的裂解能力，甚至可處理困難的樣品類型

• 針對(duì)組織、細(xì)胞、血清、病毒和細(xì)菌進(jìn)行優(yōu)化的配方和方案

從多種樣品體積和來(lái)源中可靠純化 RNA

TRIzol™ 試劑可很好地處理少量組織 (50–100 mg) 和細(xì)胞 (5 × 106) 以及大量組織 (≥1 g) 和細(xì)胞 (>107)，且包含用于從人、動(dòng)物、植物或細(xì)菌來(lái)源的樣品中進(jìn)行純化的方案。TRIzol™ 試劑通過(guò)在樣品均質(zhì)化期間高效抑制 RNase 活性維持 RNA 的完整性，同時(shí)破壞細(xì)胞并溶解細(xì)胞組分。TRIzol™ 試劑方法的簡(jiǎn)單性使其可同時(shí)處理大量樣品。可在不到 1 小時(shí)的時(shí)間內(nèi)完成整個(gè)程序。通過(guò) TRIzol™ 試劑分離的總 RNA 不含蛋白和 DNA 污染。

其配方可分離多種分子靶標(biāo)

TRIzol™ 試劑可使您連續(xù)沉淀單份樣品中的 RNA、DNA 和蛋白。使用 TRIzol™ 試劑均質(zhì)化樣品后，加入氯仿，使勻漿分離成透明的上層水層（含 RNA）、中間相和紅色下層有機(jī)層（含 DNA 和蛋白）。使用異丙醇從水層中沉淀出 RNA。使用乙醇從中間相/有機(jī)層中沉淀出 DNA。通過(guò)異丙醇沉淀從苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。將沉淀出的 RNA、DNA 或蛋白洗滌以去除雜質(zhì)，然后重懸以用于下游應(yīng)用。

產(chǎn)品名稱：Invitrogen TRIZOL、Trizol Reagent、一步法總RNA提取試劑

品牌：Invitrogen 

貨號(hào)：15596026 （100ML）和15596018（200ML）

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：可快速簡(jiǎn)單地獲得高純度總RNA

保存溫度：2-8度

效期：4度保存可2年

用途：TRIZOL試劑純化的RNA可用于PCR、RNA印跡分析、poly（A）+篩選或斑點(diǎn)雜交。純化的DNA和蛋白質(zhì)分別適用于DNA和蛋白質(zhì)印跡分析。

Invitrogen TRIZOL說(shuō)明書(shū)：

從細(xì)胞中提取總RNA 
1） 培養(yǎng)貼壁細(xì)胞：不須消化，可直接用Trizol進(jìn)行消化、裂解，Trizol體積按10cm2/ml比例加入。 
2） 懸浮細(xì)胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106動(dòng)物、植物或酵母細(xì)胞，或107細(xì)菌細(xì)胞。
從組織中提取總RNA 
1）液氮研磨，組織塊直接放入研體中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮， 
再研磨，如此三次，按50-100mg組織/mlTrizol加入Trizol，轉(zhuǎn)移入離心管進(jìn)行第2步操作。 
2） 勻漿：組織樣品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，組織體積不能超過(guò)Trizol體積 
的10%，否則勻漿效果會(huì)不好，用電動(dòng)勻漿器充分勻漿約需1-2分鐘。 
2．細(xì)胞或組織加Trizol后，室溫放置5min，使其充分裂解。注：此時(shí)可放入-70℃長(zhǎng)期保持。 
3．12000rpm 離心5min，棄沉淀。 
4．按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振蕩混勻15分鐘，室溫放置15min。注：禁用漩渦振蕩器， 
以免基因組DNA斷裂。 
5．4℃12000g離心15min。 
6．吸取上層水相，至另一離心管中。 
注：1）千萬(wàn)不要吸取中間界面。 
2）若同時(shí)提取DNA和蛋白質(zhì)，則保留下層酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，則棄下層酚相。 
7．按0.5ml異丙醇/ml Trizol 加入異丙醇混勻，室溫放置5-10min。 
8．4℃ 12000g離心10min，棄上清，RNA沉于管底。 
9．按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。 
10．4℃ 8000g離心5min，盡量棄上清。 
11．室溫晾干或真空干燥5-10min。 注：RNA樣品不要過(guò)于干燥，否則很難溶解。 
12．可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA樣品，55-60℃5-10min。 
注：H2O、TE或0.5%SDS均須用DEPC處理并高壓。 
12、測(cè)O.D值定量DNA濃度。 
注：1）此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。 
2） 產(chǎn)率估計(jì)：組織標(biāo)本：（ug RNA組織）1-10ug，培養(yǎng)細(xì)胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。 
注：1、組織或細(xì)胞量過(guò)少，可酌情減少Trizol用量。 
2、組織或細(xì)胞用量過(guò)多，會(huì)引起DNA對(duì)RNA的污染。 
3、高蛋白，脂肪或多糖類組織，肌肉組織或塊狀植物組織等，組織勻漿或液氮研磨 
后須4℃ 1200離心10min去掉不溶物，再進(jìn)行下面操作，若頂層有脂肪物，則 
也須去掉。 
4、熱天提RNA，帶手套是必須的，手是RNase的主要來(lái)源。 
5、組織塊用液氮研磨，****，若沒(méi)有液氮或電動(dòng)勻漿器，可用手動(dòng)勻漿器代替， 
此時(shí)組織塊不宜過(guò)大，且需先用眼科剪將組織絞碎，然后再充分研磨。 

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